بسم الله الرحمن الرحيم
prothrombin time (زمن البروثرومبين)
زمن البروثرومبين
إن اختبار زمن البروثرومبين من الاختبارات السريرية الحرجة، ويجب إجراؤه باستخدام كواشف ثرومبوبلاستين عالية الحساسية والتي تملك مشعر الحساسية الدولي قريباً من الواحد.
يؤثر انحلال عينة الدم على هذا الاختبار تأثيراً كبيراً لذا يجب تجنبه تماماً. كما يجب استخدام سيترات الصوديوم بتركيز 0.11 مول / لتر كمانع تخثر وبنسبة حجم سيترات إلى تسعة حجوم دم، وتعدل هذه النسبة عندما يكون مقدار الهيماتوكريت خارج المجال 31 – 54% وفق جدول خاص تم ذكره.
يمكن أن يتم حساب فاعلية البروثرومبين وقيمة الـ INR باستخدام الحاسوب من خلال برنامج Excel، وأنصح اختصاصي المخبر بمحاولة عمل فاعلية PT الخاصة به وجدول INR.
إن اختبار زمن البروثرومبين من الاختبارات القديمة المعروفة، والتي تطورت تدريجياً، وأصبحنا نعرف الكثير عنها، ويدعى هذا الاختبار أيضاً زمن كويك Quick وهو اسم طبيب أمريكي من مواليد عام 1894، وهو أول من طبق هذا الاختبار عام 1935، وقد زاد الطلب على هذا الاختبار مؤخراً وخاصة لدى المرضى الذين يتناولون الحبوب المانعة للتخثر Anticoagulant، وأيضاً لدى المصابين بالنزوف الدموية، ولدى مرضى الآفات الكبدية المزمنة.
فما هو هذا الاختبار؟ وما شروط إجرائه؟ وكيف يتم التعبير عن نتائجه مخبرياً؟ وكيف يمكن تجهيز جداول بأزمنة المرضى والفعالية والـ INR بكل سهولة بمساعدة الحاسوب؟
المبدأ
يقيس زمن البروثرومبين زمن تخثر البلازما منزوعة الكالسيوم والسيتراتية في الدرجة 37°م، وبوجود الثرومبوبلاستين النسيجي (عامل التخثر الثالث III) والكالسيوم (عامل التخثر الرابع IV) بمقدار كاف. بـزل الدم
* حالة المريض
- يجرى الاختبار قبل موعد الجرعة التالي، ليتم تعديل الجرعة من قبل الطبيب المعالج، إن لزم الأمر. وقد ذكرت بعض المراجع أنه يجب أن يكون المريض على الريق لأن الأطعمة الدسمة تؤثر على الاختبار، وقد تبين عملياً عدم تأثير البلازما الشحمية على المعايرة.
- الأخذ بعين الاعتبار العقاقير المأخوذة خلال الساعات، بل حتى الأيام السابقة.
- إن كان المريض معالجاً بالهيبارين أيضاً، ولمنع تأثير الهيبارين على قياس زمن البروثرومبين PT، يسحب الدم بعد 5 ساعات إن كان الهيبارين قد أعطي وريدياً دفعة واحدة، أو بعد 4 ساعات إن كان الهيبارين قد أعطي تنقيطاً، أو بعد 24 ساعة إن كان الهيبارين قد أعطي تحت الجلد. وهناك بعض الشركات التي أضافت لكواشف الثرومبوبلاستين المستخدم في معايرة PT أضداداً للهيبارين لمنع تأثيره.
* الدم الوريدي
- هو المفضل، وحتى عند المواليد الجدد.
- يجب أن يكون السحب نظيفاً، وبدون مناورات أو ركودة وريدية زائدة، لأن تحرر الثرومبوبلاستين النسيجي ينقص PT.
- ينصح بسـحب الدم على الأنابيب المخـلاة من الهواء Evacuated tubes إن أمكن، وعند السحب بالمحاقن العادية فيجب الإسراع بإضافة الدم ومزجه لأن أي تأخير في الإضافة أو المزج يسبب تخثراً جزئياً واستهلاكاً لعوامـل التخثر مؤدياً إلى تطاول في PT، PTT، ونقصاً في تعداد الصفيحات.
- عند السحب على الأنابيب المخلاة، يجب سحب الدم على أنبوب السيترات أولاً ثم أنبوب الهيبارين ثانياً.
- تجنب انحلال الدم: فالانحلال الخفيف يقصر زمن البروثرومبين، والانحلال الشديد يطيله.
- قد تؤثر البلازما العكرة والشحمية واليرقانية على النتائج. وذلك عند القراءة على الأجهزة التي تعمل على المبدأ الضوئي لا الميكانيكي.
- يجب عدم سحب الدم من القثاطر الوريدية، لأن العينات المسحوبة منها تكون غالباً مـمددة بالمحاليل المعطاة، أو ملوثة بالهيبارين.
- يفضل أخذ الدم الأخير المسحوب، وتودع أول 2- 3 مل من الدم للتحاليل الأخرى.
- الإسراع بإضافة الدم إلى مانع التخثر ومزجه بالقلب اللطيف 3 مرات على الأقل، وتجنب تشكيل الفقاعات.
* الدم الشعري
طورت بعض الشركات أجهزة وأشرطة خاصة، لإجراء PT على الدم الشعري، ومن قبل المريض نفسه.
* مانــع التخثر
1- سيترات الصوديوم الثلاثية حصراً وبتركيز 0.11 مول/ لتر، وبنسبة حجم سيترات إلى تسعة أحجام من الدم. في أنابيب محكمة الإغلاق ومعقّمة وخالية من المعادن. تتواجد السيترات إما بشكل: ثنائية جزيئة الماء Na3C6H3O7.2H2O ويؤخذ منها 31.3 غ /لتر ماء مقطر، أو خماسية جزيئة الماء Na3C6H3O7.5H2O ويؤخذ منها 38 غ / لتر ماء مقطر.
2- يحذر من استخدام موانع التخثر الأخرى: الاديتات EDTA، الهيبارين، أوكزالات الأمونيوم: لأنها تطيل PT بشدة
3- يجب المحافظة على نسبة مانع التخثر إلى الدم، مع قبول التغيير حتى 10%، وضمن مجال هيماتوكريت 31 – 54% وإلا وجب تعديل النسبة بين الدم ومانع التخثر حسب الجدول 1. وعدم إجراء هذا التعديل يؤدي إلى قصر الزمن في حال فقر الدم، أو تطاوله في حال احمرار الدم.
التنبيذ:
* ضروري للحصول على البلازما الفقيرة بالصفيحات الدموية.
* ينبذ بأسرع ما يمكن بقوة التنبيذ النسبي (Relative Centrifugal Force (RCF: g 1500 – 2000 (جاذبية gravities) وتعادل في المنبذات الصغيرة 3000 – 4000 دورة / الدقيقة (RPM) ولمدة ربع ساعة.
ثبات العينة
* تودع البلازما بحرارة الغرفة (20 – 25°م)، ريثما يتم إجراء الاختبار، ولا تترك أكثر من ساعتين، فعامل التخثر المشترك الخامس V عطوب اسماً وفعلاً.
* يحذر من وضع البلازما في البراد 4 – 8°م لأن البرودة تنشط العامل السابع والعامل الصفيحي، فينقص زمن البروثرومبين عن الزمن الحقيقي.
* يمكن تجميد العينات بالدرجة (– 20°م) لأسبوعين بشرط الفصل الجيد للبلازما، وتجنب ســحب الكريات مع البلازما، والتي إن وجدت فسوف تنقص PT.
* إن ترك البلازما معرضة للهواء دون غطاء يزيد باهاء pH البلازما، بسبب انطلاق غاز CO2.
الكواشف Reagents
* الثرومبوبلاستين Thromboplastin (عامل التخثر الثالث III):
عبارة عن خلاصات نسيجية مأخوذة من العديد من الأنواع (إنسان – أرنب) والأعضاء المختلفة (دماغ – رئة - مشيمة) وتصنع حالياً بطريقة التأشيب Recombinant. ومتوفرة من مصادر (شركات) مختلفة بشكل جُفادة، وهي المفضلة على المحاليل الجاهزة بسبب ثباتيتها قبل فتح العبوة وبعده.
حل الكاشف: - يُنزع غطاء العبوة بحـذر، لمنع ضياع الكاشف.
- يُضاف بالضبط الكمية الملائمة من الماء المقطر (pH = 7.2 - 6. أو المُمَدد الخاص وهو الأفضل دوماً، وتترك العبوة دون قلب أو مزج لمدة ربع ساعة، وبعدها تمزج بالقلب عدة مرات، ليصبح الكاشف جاهزاً للعمل بعد تدفئته. ثبات الكاشف: - الكاشف ثابت قبل الإذابة حتى تاريخ انتهاء الفعالية المدون عليه إن حفظ مغلقاً بالبراد بحرارة 4 – 8°م.
- الكاشف ثابت بعد الإذابة 8 ساعات بحرارة 37°م (لذا يجب حضن كمية مناسبة للعمل اليومي وليس كامل العبوة) ولمدة 24 ساعة بحرارة الغرفة 20 – 25°م، أو لـ 7 أيام بالبراد بحرارة 2 – 8°م. ملاحظة: يجب ألا يجمد الكاشف (على ذمّة الشركات المصنّعة) لكن وجد عملياً أن الكاشف ثابت تماماً بالتجميد ولمدة شهر على الأقل.
* دارئة ميكائيليس Michaelis Buffer: مخصص لتمديد البلازما عند إجراء السلسلة العيارية.
* شواهد: طبيعية ومرضية بمستويات مختلفة للتأكد من جودة العمل المخبري، وتوجد بشكل جفادة تُذاب عند استخدامها.
الأنابيب والممصات والأدوات:
• ينصح باستخدام الأنابيب المخبرية المخصصة للعمل لمرة واحدة وذات القطر الخـارجي الثابت 10- 12 مم والمـبـطنة بالسليكون والخالية من الخدوش.
• ينصح باستخدام الممصات نصف الآلية والرؤوس الخاصة المستخدمة لمرة واحدة ويُستخدم رأس جديد لكل كاشف إذ أن حدوث أي تلوث بسيط لكاشف PTT من كاشف PT مثلاً يقصر من PTT.
• عند الرغبة باستخدام الأنابيب لمرة ثانية يجب نقعها بمحلول حمضي 10 % HCl مثلاً أو محلول السلفوكروميك ليلة كاملة ثم الغسيل بالماء المقطر ثلاث مرات على الأقل، وتجفيفها بالفرن، ثم تحفظ بعيداً عن الغبار.
• يجب عدم استخدام المنظفات Detergents.
• في أجهزة التخثر هناك محافد بلاستيكية ذات حجم وشكل ثابت وقطع مغناطيسية جاهزة للعمل لمرة واحدة.
• حرارة المحم المائي أو حرارة حجيرة التخثر يجب أن تكون ثابتة 37 ± 0.2°م لأن زمن تشكل الخثرة يتناسب عكساً مع درجة حرارة الكاشف.
• إنارة كافية لرؤية الخثرة (بالقراءة اليدوية).
• ميقاتية ثوان.